Identification of Cryptosporidiumspecies and genotypes in dairy cattle in Brazil

In this study, we identified Cryptosporidium species and genotypes present in dairy cattle in the central region of São Paulo state, Brazil. Fecal specimens were collected from 200 animals (100 calves and 100 cows) in ten dairy farms. Fecal samples were examined using microscopic examination (ME), enzyme immunoassay (EIA) and polymerase chain reaction (PCR). Cryptosporidiumspecies and genotypes were determined by restriction fragment length polymorphism (RFLP) or DNA sequencing analysis of the SSU-rRNA and GP60 genes. The occurrence of Cryptosporidium spp. infection was 14% (28/200). The occurrence in calves (26%) was significantly higher than in cows (2%). Of the 27 Cryptosporidium-positive specimens submitted to genotyping, C. andersoni was identified in 23 (85.1%), C. bovis in three (11.1%), and the zoonotic C. parvum subtype IIaA15G2R1 in one (3.7%). The study demonstrates thatCryptosporidium spp. infection was common and widespread in dairy cattle in this region and that calves have a high prevalence of C. andersoni. Furthermore, the presence of C. parvumsubtype IIaA15G2R1 indicates that dairy calves from this region should be considered a potential source of zoonotic Cryptosporidiumoocysts.

No presente estudo foram identificadas espécies e genótipos de Cryptosporidium originadas de bovinos leiteiros na região central do estado de São Paulo, Brasil. Amostras fecais foram coletadas de 200 animais (100 bezerros e 100 vacas) em 10 propriedades leiteiras. As amostras foram examinadas utilizando os métodos de microscopia óptica (MO), ensaio imunoenzimático (EI) e reação em cadeia da polimerase (PCR). As espécies e genótipos de Cryptosporidium foram determinados pelo método de polimorfismo no tamanho dos fragmentos de restrição (RFLP) ou sequenciamento dos genes SSU-rRNA e GP60. A infecção por Cryptosporidium spp. teve ocorrência de 14% (28/200). A ocorrência em bezerros (26%) foi significativamente maior do que em vacas (2%). Do total de 27 amostras positivas submetidas à caracterização genética, C. andersoni foi identificado em 23 (85.1%), C. bovis em três (11.1%) e C. parvum subtipo IIaA15G2R1 em uma (3.7%). O presente estudo demonstrou que a infecção por Cyptosporidium é comum e difundida em bovinos leiteiros nessa região e que bezerros possuem uma alta prevalência de C. andersoni. A presença de C. parvum subtipo IIaA15G2R1 indica que bezerros leiteiros dessa região devem ser considerados uma fonte de oocistos deCryptosporidium com potencial zoonótico.

Obtenção de animais negativos para Circovírus suíno 2 oriundos de granjas positivas: estratégia de manejo

The present study describes a strategy to obtaining PCV2-negative animals from a PCV2-positive herd. Sixteen piglets were selected from females that had their IgG anti-PCV2 and viral circulation followed during pregnancy. These 7-days old piglets were transferred to the research unit. During the period from 7 to 49 days of age, serum, nasal and fecal swabs were collected every seven days. After this period, three animals remained in the research unit and were followed from 49 to 114 days of age, with samples taken each 28 days. No difference (p = 0.317) in viremia between gilts (n = 6) and sows (n = 10) were observed. Regarding the IgG levels, a significant difference (p = 0.0213) were found between gilts and sows. The piglets (n = 16), obtained from the two females, were transferred to the research unit. The animals between 7 and 10 and 49 and 52 days of age showed a decreased of the IgG title and absence of IgM; the serum and fecal and nasal swabs were negative for PCV2 DNA. After 49 days of age, the three remained animals negative for IgG, IgM and viral DNA for PCV2. In conclusion, the strategy of handling used herein allowed the obtention of PCV-2 negative pigs from PCV2-positive herds.

O objetivo do trabalho é descrever uma estratégia para a obtenção de animais negativos para o PCV2 oriundos de uma granja positiva para este vírus. Dezesseis leitões foram obtidos de fêmeas que tiveram os títulos de IgG anti-PCV2 e o DNA viral testados durante a gestação. Esses leitões, aos sete e dez dias de idade, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Durante o período de 7 e 10 aos 49 e 52 dias de idade, amostras de soro, suabes nasal e fecal foram coletadas, a cada sete dias. Após esse período, três animais permaneceram na unidade de pesquisa e foram acompanhados dos 49 aos 114 dias de idade, com coletas realizadas a cada 28 dias. Não houve diferença significativa (p = 0,317) de viremia entre marrãs (n = 6) e porcas (n = 10). Com relação aos níveis de IgG, observou-se diferença significativa (p = 0,0213) entre porcas e marrãs. Os leitões (n = 16), obtidos de duas fêmeas, foram transferidos para a unidade de pesquisa. Os animais entre 7 e 10 dias e aos 49 e 52 dias de idade apresentaram queda de IgG e ausência de IgM anti-PCV2; e as amostras de soro, suabe nasal e fecal foram negativos para o DNA de PCV2. Após os 49 dias, nos três animais mantidos isolados, a detecção de IgG, IgM e DNA para PCV2 permaneceu negativa. Concluindo, a estratégia de manejo utilizada permitiu obter suínos negativos para PCV2 oriundo de granjas positivas para o agente.

Vírus da leucemia felina: análise da classificação da infecção, das técnicas de diagnóstico e da eficácia da vacinação com o emprego de técnicas sensíveis de detecção viral

Feline leukemia virus (FeLV) belongs to the Retroviridae family, genus Gammaretrovirus. Unlike other retroviruses, a portion of FeLV exposed animals eliminates antigenemia/viremia, according to convectional techniques of virus detection, such as isolation in cell culture, direct fluorescent antibody test and ELISA. The use of more sensitive techniques to detect and quantify viruses enabled the detection of proviral DNA and RNA in cats with undetectable antigenemia/viremia, and thus the refinement of the different infection outcomes analysis. As a result, FeLV pathogenesis was reclassified in 4 categories: abortive, regressive, latent and progressive infections. It was also demonstrated the detection of proviral DNA and RNA in cats believed to be immune to infection after vaccination. Therefore, the objectives of this review were to demonstrate the implications of the use of sensitive techniques for viral detection in the interpretation and classification of FeLV infection and reconsider the techniques for FeLV diagnostic purposes. In addition, it was presented the results concerning the effectiveness of FeLV vaccination with the use of these techniques.

O Vírus da leucemia felina (FeLV) pertence à família Retroviridae, gênero Gammaretrovirus. Diferentemente de outras retroviroses, uma parcela dos gatos jovens e adultos exposta ao FeLV não apresenta antigenemia/viremia, de acordo com as técnicas convencionais de detecção viral, como isolamento em cultivo celular, imunofluorescência direta e ELISA. O emprego de técnicas de maior sensibilidade para detecção e quantificação viral, como o PCR quantitativo, permitiu a identificação de animais positivos para a presença de DNA proviral e RNA na ausência de antigenemia/viremia e, com isso, um refinamento da análise das diferentes evoluções da infecção. Assim, reclassificou-se a patogenia do FeLV em 4 categorias: infecção abortiva, regressiva, latente e progressiva. Foi possível também detectar DNA proviral e RNA em animais considerados imunes ao FeLV após vacinação. Diante disso, os objetivos desta revisão de literatura foram demonstrar as implicações da utilização de técnicas sensíveis de detecção viral na interpretação e classificação da infecção do FeLV e rever as técnicas de detecção do vírus para fins de diagnóstico. Além disso, apresentar os resultados referentes à eficácia da vacinação contra o FeLV com a utilização dessas técnicas.

Vírus da leucemia felina: análise da classificação da infecção, das técnicas de diagnóstico e da eficácia da vacinação com o emprego de técnicas sensíveis de detecção viral

Feline leukemia virus (FeLV) belongs to the Retroviridae family, genus Gammaretrovirus. Unlike other retroviruses, a portion of FeLV exposed animals eliminates antigenemia/viremia, according to convectional techniques of virus detection, such as isolation in cell culture, direct fluorescent antibody test and ELISA. The use of more sensitive techniques to detect and quantify viruses enabled the detection of proviral DNA and RNA in cats with undetectable antigenemia/viremia, and thus the refinement of the different infection outcomes analysis. As a result, FeLV pathogenesis was reclassified in 4 categories: abortive, regressive, latent and progressive infections. It was also demonstrated the detection of proviral DNA and RNA in cats believed to be immune to infection after vaccination. Therefore, the objectives of this review were to demonstrate the implications of the use of sensitive techniques for viral detection in the interpretation and classification of FeLV infection and reconsider the techniques for FeLV diagnostic purposes. In addition, it was presented the results concerning the effectiveness of FeLV vaccination with the use of these techniques.

O Vírus da leucemia felina (FeLV) pertence à família Retroviridae, gênero Gammaretrovirus. Diferentemente de outras retroviroses, uma parcela dos gatos jovens e adultos exposta ao FeLV não apresenta antigenemia/viremia, de acordo com as técnicas convencionais de detecção viral, como isolamento em cultivo celular, imunofluorescência direta e ELISA. O emprego de técnicas de maior sensibilidade para detecção e quantificação viral, como o PCR quantitativo, permitiu a identificação de animais positivos para a presença de DNA proviral e RNA na ausência de antigenemia/viremia e, com isso, um refinamento da análise das diferentes evoluções da infecção. Assim, reclassificou-se a patogenia do FeLV em 4 categorias: infecção abortiva, regressiva, latente e progressiva. Foi possível também detectar DNA proviral e RNA em animais considerados imunes ao FeLV após vacinação. Diante disso, os objetivos desta revisão de literatura foram demonstrar as implicações da utilização de técnicas sensíveis de detecção viral na interpretação e classificação da infecção do FeLV e rever as técnicas de detecção do vírus para fins de diagnóstico. Além disso, apresentar os resultados referentes à eficácia da vacinação contra o FeLV com a utilização dessas técnicas.

Occurrence of feline immunodeficiency virus infection in cats

The occurrence of feline immunodeficiency virus (FIV) in Brazil has been previously described. This study aimed to investigate the frequency of FIV infection in 454 blood samples from healthy and sick domestic cats from 13 cities of São Paulo State, Brazil as well as to evaluate the risk factors associated with the infection. The results showed that 14.7% (67/454) of the cats were infected with FIV. The clinical evaluation showed that 29.2% of the FIV-positive animals were sick, while 7.3% did not show any type of clinical manifestation. In addition, the vast majority (23.1%) of positive cases corresponded to free-roaming owned cats. The incidence of FIV infection was higher in males (20.3%) than in females (9.7%). The results suggest that certain characteristics such as gender, health status and lifestyle may be associated with the risk of being infected with FIV in the population of cats studied.

No Brasil, a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) já foi descrita. Neste estudo, objetivou-se investigar a freqüência da infecção pelo FIV em 454 amostras de sangue de gatos domésticos doentes e sadios, oriundos de 13 cidades do Estado de São Paulo, assim como avaliar os fatores de risco associados à infecção pelo FIV. Os resultados demonstraram que 14,7% (67/454) dos gatos estavam infectados pelo FIV. A avaliação clínica dos animais investigados mostrou que 29,2% dos animais soropositivos para FIV estavam doentes, enquanto 7,3% não apresentavam nenhuma manifestação clínica. Além disso, a vasta maioria dos animais positivos (23,1%) vivia em residências e tinha livre acesso à rua. A incidência da infecção pelo FIV foi maior nos gatos machos (20,3%) do que nas fêmeas (9,7%). Os resultados sugerem que certas características como sexo, estilo de vida e estado de saúde podem estar associadas ao risco de contrair a infecção pelo FIV na população de gatos estudada.

Occurrence of feline immunodeficiency virus infection in cats

The occurrence of feline immunodeficiency virus (FIV) in Brazil has been previously described. This study aimed to investigate the frequency of FIV infection in 454 blood samples from healthy and sick domestic cats from 13 cities of São Paulo State, Brazil as well as to evaluate the risk factors associated with the infection. The results showed that 14.7% (67/454) of the cats were infected with FIV. The clinical evaluation showed that 29.2% of the FIV-positive animals were sick, while 7.3% did not show any type of clinical manifestation. In addition, the vast majority (23.1%) of positive cases corresponded to free-roaming owned cats. The incidence of FIV infection was higher in males (20.3%) than in females (9.7%). The results suggest that certain characteristics such as gender, health status and lifestyle may be associated with the risk of being infected with FIV in the population of cats studied.

No Brasil, a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) já foi descrita. Neste estudo, objetivou-se investigar a freqüência da infecção pelo FIV em 454 amostras de sangue de gatos domésticos doentes e sadios, oriundos de 13 cidades do Estado de São Paulo, assim como avaliar os fatores de risco associados à infecção pelo FIV. Os resultados demonstraram que 14,7% (67/454) dos gatos estavam infectados pelo FIV. A avaliação clínica dos animais investigados mostrou que 29,2% dos animais soropositivos para FIV estavam doentes, enquanto 7,3% não apresentavam nenhuma manifestação clínica. Além disso, a vasta maioria dos animais positivos (23,1%) vivia em residências e tinha livre acesso à rua. A incidência da infecção pelo FIV foi maior nos gatos machos (20,3%) do que nas fêmeas (9,7%). Os resultados sugerem que certas características como sexo, estilo de vida e estado de saúde podem estar associadas ao risco de contrair a infecção pelo FIV na população de gatos estudada.

Detection of enterotoxins genes in coagulase-negative staphylococci isolated from foods

Staphylococcal food poisoning is caused by ingestion of enterotoxins preformed in the food contaminated essentially through human manipulation or raw material obtained from animals. Although coagulase-positive Staphylococcus aureus is the main agent responsible for food intoxication, some researches emphasise that coagulase-negative staphylococci (CNS) are able to produce staphylococcal enterotoxins and may be a potential cause of food poisoning. In the present study CNS were isolated from foods and the toxigenic capacity of the strains determined. A total of 88 food samples were analysed and 22.7% were positive for CNS strains. Staphylococcal counts ranged from 3.0 x 10² to 1.4 x 10(6) CFU/g or mL of food examined. S. epidermidis predominated among the isolates (40%). Further isolates included S. xylosus (20%), S. warneri (20%), S. saccharolyticus (15%), and S. hominis (5%). Four isolates were positive for enterotoxin genes, as detected by polymerase chain reaction, with sea being the predominant gene. Although no enterotoxin production was detected by the reverse passive latex agglutination method, the data showed that the toxigenic capacity of CNS should not be ignored, requiring investigation of this group of microorganisms in food.

A intoxicação alimentar estafilocócica ocorre devido à ingestão de alimentos contaminados com enterotoxinas. Essa contaminação tem sido oriunda, principalmente, da manipulação humana, ou de matérias-primas procedentes de animais portadores. Embora Staphylococcus aureus coagulase positiva, seja o principal agente de intoxicação alimentar, alguns pesquisadores enfatizam que os estafilococos coagulase-negativa (ECN) podem produzir as enterotoxinas estafilocócicas, podendo contribuir para a intoxicação alimentar. Este estudo teve como objetivos isolar os ECN de alimentos e verificar a capacidade enterotoxigênica dessas linhagens. Foram estudadas 88 amostras de alimentos, sendo que 22,7% foram positivas para ECN com crescimento entre 10² e 10(6) UFC/g or mL. A espécie predominante dentre as linhagens isoladas foi S. epidermidis (40%), seguido por S. warneri (20%), S. xylosus (20%), S. saccharolyticus (15%) e S. hominis (5%). Entre as linhagens isoladas, quatro apresentaram genes para produção de enterotoxinas pelo método de Reação da Polimerase em Cadeia (PCR), com predominância do gene sea. Não se detectou a produção de enterotoxina pelo método de aglutinação em látex (RPLA). Através dos resultados obtidos, observou-se que os ECN isolados de alimentos não devem ser ignorados quanto à sua capacidade toxigênica, necessitando de maior estudo e atenção para melhor caracterização desse grupo de microrganismos em alimentos.

Correlation of clinical and hematological with definitive diagnosis of canine ehrlichiosis by PCR / Correlação dos achados clínicos e hematológicos com diagnóstico definitivo de erliquiose canina por meio de PCR

The Ehrlichiosis is a worldwide diseases of great importance in a veterinary medicine is an important infectious diseases whose prevalence has increased significant in the last year in the Brazilian states. Due to the fact that this study was designed to correlate the findings hematological clinical signs and PCR, being the most sensitive. This study evaluated twenty dogs seen at veterinary hospital UNESP Botucatu campus during the 03 from august to September 28 2009. Animal cited 65% were positive in the PCR test. Among the most prominent clinical findings 76.92% (10/13) with anorexia, 53.84% (7/13) with hepatoesplenomegaly, 46.15% (6/13) with apathy and 38.46% (5/13) epistaxis. The thirteen animals positive PCR 92.30% (12/13) showed thrombocytopenia ( 150.000 platelets) e 61.53 (8/13) anemic ( 5.50 x10). Thus, we conclude that the PCR was a good method for detection differential canine ehrlichiosis may be adopted together with the clinical and hematological findings for the accurate diagnosis of the disease.

A Erliquiose é uma doença cosmopolita de grande importância na clínica médica veterinária, sendo uma importante enfermidade infecciosa, cuja prevalência tem aumentado significantemente nos últimos anos nos estados brasileiros. Devido a esse fato, o presente trabalho teve o intuito de correlacionar os achados hematológicos, sinais clínicos e PCR, sendo este último o mais sensível. No trabalho foram avaliados 20 cães com suspeita de Erliquiose que foram atendidos no setor de Moléstias Infecciosas do Hospital Veterinário da UNESP Campus Botucatu SP, durante oito semanas. Dos animais citados, 65,00% (13/20) foram positivos em exame da PCR, nestes os achados clínicos mais evidentes foram 76,92% (10/13) anorexia, 53,84% (7/13) hepatoesplenomegalia, 46,15% (6/13) apatia e 38,46% (5/13) epistaxes. Dos treze animais positivos na PCR 92,30% (12/13) apresentaram-se trombocitopênicos ( 150.000 plaquetas) e 61,53% (8/13) anêmicos ( 5.50 x106). Frente ao exposto, conclui-se que a técnica de PCR foi um bom método diferencial na detecção de Erliquiose canina podendo ser adotada, juntamente com os achados clínicos e hematológicos para o diagnóstico preciso da enfermidade em questão.

Correlation of clinical and hematological with definitive diagnosis of canine ehrlichiosis by PCR / Correlação dos achados clínicos e hematológicos com diagnóstico definitivo de erliquiose canina por meio de PCR

The Ehrlichiosis is a worldwide diseases of great importance in a veterinary medicine is an important infectious diseases whose prevalence has increased significant in the last year in the Brazilian states. Due to the fact that this study was designed to correlate the findings hematological clinical signs and PCR, being the most sensitive. This study evaluated twenty dogs seen at veterinary hospital UNESP Botucatu campus during the 03 from august to September 28 2009. Animal cited 65% were positive in the PCR test. Among the most prominent clinical findings 76.92% (10/13) with anorexia, 53.84% (7/13) with hepatoesplenomegaly, 46.15% (6/13) with apathy and 38.46% (5/13) epistaxis. The thirteen animals positive PCR 92.30% (12/13) showed thrombocytopenia ( 150.000 platelets) e 61.53 (8/13) anemic ( 5.50 x10). Thus, we conclude that the PCR was a good method for detection differential canine ehrlichiosis may be adopted together with the clinical and hematological findings for the accurate diagnosis of the disease.

A Erliquiose é uma doença cosmopolita de grande importância na clínica médica veterinária, sendo uma importante enfermidade infecciosa, cuja prevalência tem aumentado significantemente nos últimos anos nos estados brasileiros. Devido a esse fato, o presente trabalho teve o intuito de correlacionar os achados hematológicos, sinais clínicos e PCR, sendo este último o mais sensível. No trabalho foram avaliados 20 cães com suspeita de Erliquiose que foram atendidos no setor de Moléstias Infecciosas do Hospital Veterinário da UNESP Campus Botucatu SP, durante oito semanas. Dos animais citados, 65,00% (13/20) foram positivos em exame da PCR, nestes os achados clínicos mais evidentes foram 76,92% (10/13) anorexia, 53,84% (7/13) hepatoesplenomegalia, 46,15% (6/13) apatia e 38,46% (5/13) epistaxes. Dos treze animais positivos na PCR 92,30% (12/13) apresentaram-se trombocitopênicos ( 150.000 plaquetas) e 61,53% (8/13) anêmicos ( 5.50 x106). Frente ao exposto, conclui-se que a técnica de PCR foi um bom método diferencial na detecção de Erliquiose canina podendo ser adotada, juntamente com os achados clínicos e hematológicos para o diagnóstico preciso da enfermidade em questão.